Inoculabilldad de la Derruga peruana ó los animales Primeras ieniaiinas de inmunización en la Derruga peruana Trabajos presentados al V Congreso íDédico Latino Americana, VI Pan-Americano, (bima, 9-16 de noDiembre de I9Í3), por los Drs. Ramón E. Ribeuro, Daniel (BaeRehenie y Sultán Arce Imprenta y Fábrica de Fotograbado? Sanmartí y Ca. - Lima Calle de San Pedro, 388 y 392-57652 Trabajos presentados al V Congreso ÍDédico Latino Americano, Vi Pan-Americano, (Lima, 9-16 de noniembre de 1913), por ios Drs. Ramón E. Ribeyro, Daniel ÍDaekehenie y Uulián Arce Inoculabilidad de la Derruga peruana á los animales Primeras feniafiuas de inmunización en la verruga peruana Trabajos presentados al V Congreso ÍDédico Latino Americano, ÜI Pan-Americano, (Lima, 9-16 de noniembre de 1913), por ios Drs. Ramón E. Ribeyro, Daniel (Daekehenie y Dulián Arce v ¥ > Imprenta y Fábrica de Fotograbados Sanmartí y Ca. Lima Calle de San Pedro, 388 y 392-57652 INOCULABILIDAD DE LA VERRUGA PERUANA A LOS ANIMALES Se ha creído, generalmente, que los animales contraían espontá- neamente la verruga en los lugares donde es endémica la enfer- medad, y esta creencia,aceptada también por el cuerpo médico, dió origen á la designación tan conocida de verruga mular. Pero,debe ad- vertirse que las numerosas tentativas de trasmisión experimental de la verruga á los animales, practicadas con éxito invariablemen- te negativo (experiencias de los Drs. Biffi, Tamayo, Gastiaburu y Ribeyro), inspiraron dudas justificadas respecto de aquella creencia popular. Después de muchas inoculaciones infructuosas, consiguió Ta- mayo (1) en 1899, producir experimentalmente un botón verruco- so en el perro, mediante la inoculación subcutánea de 1 c.c. de san- gre tomada de un enfermo atacado de fiebre grave de Carrión. Pos- teriormente, no se pudo obtener ningún resultado positivo hasta 1910, en que Jadassohn y Seifert de Berna (2), lograron inocular monos (cercophitecus sabaeus y macacus rhesus) con buen éxito. En diciembre de 1912, Mayer, Rocha Lima y Werner, de Ham- burgo (3), obtuvieron resultados igualmente positivos en monos (cercophitecus y macacus). Tal es, á grandes rasgos, la historia de las inoculaciones experimentales de la verruga hasta el 13 de junio (1) M. O. Tamayo-«La Crónica Médica»-Lima 1899. (2) Análisis en el «Bull. Inst. Pasteur»-1910. (3) Münchener Medizinischer Wochenschriít-Abril 8 de 1913. 6 del presente año, en que practicamos nuestras experiencias, cuyo resultado ha sido positivo en los siguientes animales: Mono inferior (cebus). Asno. Cabra. Carnero. Perro y Conejo. HE AQUI EL PROTOCOLO DE LAS EXPERIENCIAS. INOCULACIONES EN CONEJOS: la. El 13 de junio de 1913, se inocularon dos conejos, practi- cando escarificaciones en la piel del dorso, con verruga molida pro- veniente del enfermo n° 11 de la sala de «San Roque» (Hospital 2 de Mayo). El resultado fué negativo, no se produjo ningún desa- rrollo, ni en el sitio de la inoculación, ni en ningún otro. 2a. Otro conejo inoculado el mismo dia, en igualdad de condi- ciones, murió de coccidiosis hepática. 3a. El 13 de julio, se inoculó el conejo blanco n° 6, de 1,600 gramos de peso. La inoculación,que fué intratesticular, se hizo de la siguiente manera: se trituró, en un mortero de porcelana,una verru- ga de Ja piel del enfermo n° 8 de la sala de San Francisco (Hospi- tal 2 de Mayo); se diluyó en cinco veces su peso de agua fisiológica estéril y de esta suspensión se inyectó 0.1 de c.c. en cada testículo. Tres dias después, hubo ligero edema de ambas bolsas;pero el tejido testicular parecía indemne. El 23 de julio, se notó en el testículo iz- quierdo un nodulo central, duro, que formaba cuerpo con el teste mismo. En el testículo derecho, nada.(Lámina I-Fig. n° 1). El nódulo continuó creciendo y llegó á dar al testículo, con sus envolturas, una dimensión de 7 cm. en su eje mayor. Hasta el 4 de agosto,continuó el crecimiento; después, se notó tendencia á la re- gresión. En el testículo derecho, nada. El 10 de agosto, se extir- pó el testículo verrucoso, a fin de practicar el exámen histológico. Exámen macroscópico'.-NbóvÓQ de consistencia dura, desarro- llado en pleno tejido testicular, de aspecto uniforme, de color blanco amarillento. Exámen microscópico-. Neoformación desarrollada á expensas del tejido conjuntivo intersticial, que disloca los tubos seminíferos, los atrofia ó los hace degenerar. Consta esencialmente de angioblas- tos polimorfos,que,en su mayor parte y de modo evidente, constitu- yen capilares. La sección de uno de estos, siguiendo el eje longitu- dinal, deja ver una doble hilera de elementos fusiformes, con nú- cleos cilindricos y alargados, que resaltan en la luz del vaso. El nú- cleo, convenientemente teñido, ostenta una red laxa de cromatina y uno ó dos nucléolos brillantes. Hay capilares que parecen termi- nar por puntas protoplasmáticas, yemas ó brotes de acrecentamien- Lamina I Fig. 1 Conejo N- 6.--Verruga intratesticular (testículo izquierdo). Fig 2 Conejo N. 7.-Verruga intratesticular en ambos testes. 7 to. En un corte perpendicular, se vé, que dos,tres ó cuando más cua- tro células, limitan el vaso que es siempre estrecho. Los capilares, algunas veces paralelos y muy juntos, forman por lo general un re- tículo, cuyas mallas están ocupadas por otras células de longitud igual á las fusiformes, pero de mucho mayor grosor, de naturaleza fagocítica. En su protoplasma adviértense leucocitos polinucleares, fáciles de reconocer, esférulas de cromatina, ora aisladas y de diáme- tro superior á un micron, ora menores, casi pulverulentas. A estas dos categorías de elementos,por sus reacciones tintoria- les, les damos el mismo valor endotelial. Hallamos además: linfocitos, que infiltran las inmediaciones de los vasos, pero sin formar manguitos perivasculares; leucocitos li- bres ó incluidos; glóbulos rojos extravasados; células plasmáticas en división. Toda esta masa proliferante, que distiende la albugí- nea, sin romperla, se insinúa entre los elementos nobles: los tubuli. los comprime, los deforma ó los necrosa. Hay regiones en que los tubos no se reconocen,sino por series concéntricas de núcleos ape- nas teñidos. Resultado de esta primera inoculación positiva: Es posible tras- mitir la verruga humana al conejo, por inyección intratesticular. In- cubación: 10 días. 4a. El 13 de julio, se inoculó el conejo blanco n° 7, de 1,400 gramos de peso, exactamente del mismo modo que el anterior; 10 dias después de la inoculación, se notó un nodulo central en el teste izquierdo. El 26 del mismo mes, fué extirpado este órgano para practicar el exámen. El 29 de julio, se desarrolló en el testículo de- recho un nódulo verrucoso, que, extraído el Io de agosto, fué con- servado como pieza anatómica. (Lámina I-Fig. 2). Exámen macroscópico y microscópico-Testículo izquierdo: Pre- senta lesiones idénticas á las encontradas en el testículo izquierdo del conejo n° 6. En el teste derecho la neoformación ha invadido completamente el órgano, con excepción de un istmo central, sano, que parece reunir dos nodulos polares de tejido verrucoso. Se con- serva la pieza anatómica. Resultado: positivo. Incubación: 10 dias. 5a. El 13 de julio de 1913, se inoculó, por escarificación en la piel del dorso, el conejo blanco n° 8, con material proveniente del enfermo n° 8 de la sala de San Francisco (Hospital 2 de Mayo). Re- sultado: negativo. 6a. El mismo dia y con el mismo material, se inoculó el conejo n° 9, bajo la piel del dorso. En este sitio se produjo un abceso por contaminación accidental. Resultado: negativo. 7a. El 3 de agosto de 1913, se inoculó el conejo n° 15, con pul- pa de verruga proveniente del enfermo n.°4 de la sala de San Ro- que (Hospital Dos de Mayo.) La inoculación se hizo en el tes- tículo derecho. El 20 del mismo mes, se percibió un nódulo carac- terístico. Resultado: positivo. Incubación: 17 días. 8a. El 3 de agosto de 1913, se inoculó el conejo pardo n° 16, con pulpa de verruga,proveniente del enfermo n° 4 de la sala de San Roque (Hospital 2 de Mayo), diluida en solución fisiológica. Inocu- lación intratesticular; 3 dias después, los testes comenzaron á reac- 8 cionar;el 11 del mismo mes.se percibió un nodulo central en cada tes- tículo. Los nodulos aumentaron de volumen hasta el 20 de agosto. El animal fué sacrificado el 24. El testículo izquierdo, se conservó como pieza anatómica. Se hizo el examen histológico del teste dere- cho, dando un resultado análogo al del conejo n° 6.--Resultado-, po- sitivo.-Incubación: 8 dias. 9a. El 14 de setiembre de 1913, se inoculó el conejo n° 28, in- tratesticularmente, con material procedente del enfermo n° 49 de la sala de San Roque (Hospital 2 de Mayo), diluido en solución fisio- lógica. El 27 de setiembre, á los 13 dias, apareció un nódulo en el teste izquierdo. El 15 de octubre, se pudo observar un nódulo en ca- da testículo. Se sacrificó el animal el dia 19. Se conserva la pieza anatómica.-Resultado: positivo.-Incubación: 13 di as. RESUMEN DE LAS INOCULACIONES Conejos Fechas Incubación Exito Modo de inoculación 1 junio 13de 1913 negativo escarif. de la piel 2 junio 13 de 1913 - negativo escarif. de la piel 6 julio 13de 1913 16 dias positivo inyec. intratest. 7 julio 13 de 1913 10 dias positivo inyec. intratest. 8 iulio 13 de 1913 negativo inyec. subcutánea 9 julio 13 de 1913 - negativo inyec. subcutánea 15 agst. 3 de 1913 17 dias positivo inyec. intratest. 16 agst. 3 de 1913 8 dias positivo inyec. intratest. 28 stbre. 14 de 1913 13 dias positivo inyec. intratest. De lo expuesto se deduce: 1.° Que es posible trasmitir la verruga peruana al conejo; 2.° Que la neoformación verrucosa en este animal, queda limitada al punto de inoculación; 3.° Que la incubación aparente varia de 8 a 17 días; y 4.° Que la trasmisión experimental de la verruga al conejo, ha podido obtenerse por inyecciones intratesticulares, pero no por in- yección subcutánea, ni por escarificación de la piel. PASAJES EN SERIE La falta de tiempo y la escasez de material, no nos han permi- tido estudiar los pasajes en serie; sin embargo, hemos practicado la experiencia siguiente: El 24 de agosto de 1913, extrajimos un testículo verrucoso del conejo n° 16, con el que preparamos, en la forma acostumbrada, pul- pa diluida en agua fisiológica. Con este producto, inoculamos am- bos testes del conejo n° 22. El 5 de Setiembre, se observó un nodu- lo pequeño y profundo en el testículo derecho. El 15 del mismo mes, se sacrificó al animal, encontrándose un nodulito central en el tes- te derecho y el izquierdo intacto. Lamina 11 Perro N. 1.-Nodulo verrucoso de la piel 9 Exámen microscópico-, lesiones semejantes a las encontradas en el conejo n° 6, aunque menos intensas. Los tubos seminíferos se hallan menos separados los unos de los otros por el tejido de nue- va formación y parecen degenerados, aunque en menor grado. Resultado', positivo.-Incubación: 12 días. INOCULACIONES PRACTICADAS EN CUYES. Las inoculaciones practicadas en los conejillos de Indias, no nos han dado ningún resultado. Hemos practicado las siguientes experiencias: la. El 24 de agosto de 1913, se inyectó en el testículo de un cui, papilla verrucosa procedente del conejo n° 16. Resultado: ne- gativo. 2a. El 14 de setiembre, repetimos la inoculación intratesticu- lar en otro cui, con verruga molida procedente del enfermo n° 49 de la sala de San Roque (Hospital Dos de Mayo). Resultado: negativo. INOCULACIONES PRACTICADAS EN PERROS la. El 13 de junio de 1913, se inoculó el perro n° l,de 1,600 gramos de peso, con verruga del enfermo n° 11 de la sala de San Roque (Hospital Dos de Mayo). Hicimos tres escarificaciones cruciales, en la piel de la li- nea media del vientre, sobre las que se depositó pulpa de ve- rruga. A los 9 días, cayeron las costras que cubrían estas pequeñas heridas quedando la piel lisa y normal. El 5 de julio,se observó un nodulo en cada una de las escarificaciones; en los días subsiguien- tes adquirieron mayor tamaño, extirpándoseles el día 9 para hacer su examen histológico é intentar pasajes en serie. (Lámi- na II). El exámen reveló la existencia de nodulos verrucosos con sus elementos característicos: angioblastos, leucocitos, etc. Resultado: positivo.-Incubación'. 22 días. 2a. El 13 de julio de 1913, se inoculó el perro n° 2, haciéndole tres escarificaciones de la piel del vientre, con verruga del enfermo n° 8 de la sala de San Francisco (Hospital Dos de Mayo). El 25 de julio, aparecieron pápulas rojas elevadas, en el sitio de la inocula- ción, las que entraron en regresión 2 o 3 días después. Resultado: positivo.-Incubación: 12 días. RESUMEN DE LAS INOCULACIONES HECHAS EN FERROS. Perros Fechas Incubación Exito Modo de inoculación 1 13 junio 1913 22 días positivo ) í escarif. de la piel 2 13 julio 1913 12 días 10 PASAJES EN SERIE Con una de las verrugas del perro n° 1, diluida en suero, se inoculó el perro n° 3 en la misma forma que los anteriores. Resulta do: negativo. INOCULACIONES PRACTICADAS EN ASNO, CABRA Y CARNERO. Asno: El 13 de julio de 1913, inoculamos.por escarificaciones en la piel del ángulo interno del ojo izquierdo y en la piel de la nariz, pulpa de verruga proveniente del enfermo n° 8 de la sala de San Francisco (Hospital Dos de Mayo).El Io de agosto, la piel, lige- ramente elevada en el sitio de las inoculaciones,formaba una eminen- cia papulosa. El día 3,las pápulas tenían 3 a 4 mm. de diámetro y 2 mm. de alto. El 6 de agosto, estaban más elevadas y sangrantes. El 9 de agosto, comenzó la regresión, percibiéndose aun el 17 ligeras eminencias. El 20 o 21, no se podía reconocer el sitio donde hubo verrugas. (Lámina III). Cabra. El 3 de agosto, se inyectó, en dos puntos diferentes de la piel del abdomen, papilla de verruga del enfermo n° 4 de la sala de San Roque (Hospital Dos de Mayo).El 19,apareció un nódulo en el sitio de una de las inoculaciones y el 20, un segundo nódulo en el otro sitio inoculado. El 25, extirpamos uno de los nódulos que, exa- minado histológicamente, demostró una proliferación en masa de los angioblastos con tendencia marcada a la fasciculación. Resul- tado'. positivo. Incubación: 16 días. Carnero. El 3 de agosto de 1913, inoculamos, en el tejido celular subcutáneo de tres puntos diferentes de la piel del pecho, pulpa ve- rrucosa molida. El 13 se observó un nodulito, el 17 tres, uno en ca- da sitio de las inyecciones, que aumentaron de volumen hasta el día 20, comenzando después la regresión. El 21, se hizo el exámen histológico de uno de ellos. Resultado: positivo. Incubación'. 10 días. RESUMEN DE LAS INOCULACIONES PRACTICADAS EN ASNO, CABRA Y CARNERO Animal Fechas Incubación Exito Modo de inoculación Asno I 13 julio 1913 18 días positivo escarif. déla piel Cabra I 3 Agosto 1913 16 días inyec. subcutánea Carnero I 10 días 9 9 9 9 INOCULACIONES PRACTICADAS EN MONOS la. El 13 de junio de 1913, inoculamos un mono cebus, por escarificaciones en ambos arcos superciliares, con verruga del enfer- mo n° 11 de la sala de San Roque (Hospital Dos de Mayo). Resul- tado: negativo. 2a. El 13 de junio de 1913,con el mismo materialy en la misma forma, inoculamos otro cebus, escarificando los arcos superciliares y la raiz de la nariz. Resultado-, negativo. Lamina III Asno.-Nodulos verrucosos de la piel de la nariz 11 3a. El 13 de julio de 1913, inoculamos un monito cebus de 1,200 gramos de peso; inyección de pulpa verrucosa,diluida en agua fisiológica, del enfermo n° 8 de la sala de San Francisco (Hospital 2 de Mayo),en la raíz de la nariz;escarificaciones,en ambos arcos su- perciliares. El 29 de julio, se vió un nódulo en la raíz de la nariz, en el mismo sitio de la inyección, con todo el aspecto de una verruga nodular; en la ceja izquierda, en el sitio de la escarificación, apareció una verruguita sangrante, ligeramente pediculada. En la ceja dere- cha, nada. El día 2 de agosto, extirpamos la verruga nodular de la raíz de la nariz, la que examinada histológicamente, puso en eviden- cia un nódulo del tejido celular subcutáneo, sin lesión de la piel, que se encontraba simplemente levantada por la neoformación. En el centro del nódulo verrucoso, había hemorragia considerable. Re- sultado', positivo. Incubación'. 16 a7us.--( Lám. IV-Fig. 1). 4a. El 30 de Agosto de 1913, se inoculó un mono cebus, con pulpa verrucosa del enfermo n° 39 de la sala de San Roque (Hospi- tal 2 de Mayo), haciéndole una inyección subcutánea en cada arco superciliar.El 14 de Setiembre, se observó un nódulo en el arco su- perciliar derecho, del tamaño de una arveja y tres nodulos, casi fu- sionados, en el izquierdo. Se sacrificó el animal el 21 de setiembre y se conservó como pieza anatómica. Resultado', positivo. Incuba- ción'. 15 días. (Lam. IV.-Fig. 2). 5a. El 8 de octubre de 1913,inoculamos un cebus, utilizado an- tes para algunas experiencias, en las mismas condiciones que el anterior, con material del enfermo n° 49 de la sala de San Roque (Hospital 2 de Mayo).El 16 de octubre, aparecieron nodulos super- ciliares. El 26, se vieron cinco nodulitos muy semejantes a los de la verruga miliar humana, de los cuales dos ocupaban el arco superci- liar derecho, uno el izquierdo, uno el parpado inferior del mismo lado y el quinto el ángulo interno del ojo derecho. Resultado', po- sitivo. Incubación: 8 dias. (Lam. V, Fig. I). 6a. El 8 de octubre de 1913, se inoculó un mono maki con papi- lla diluidaprocedente del enfermo n° 49 de la sala de San Roque (Hospital 2 de Mayo). Inyección en el tejido celular de ambos arcos superciliares. A los 8 días apareció un nódulo en cada sitio in- yectado. Resultado-, positivo. Incubación: 8 dias. Iz. El mono mencionado en el experimento n° 1 y en el que no dió resultado la escarificación, fué nuevamente inoculado el 30 de agosto, por inyección subcutánea de verruga molida, diluida, etc. procedente del enfermo n° 39 de la sala de San Roque (Hospital 2 de Mayo), en cada arco superciliar. El 11 de setiembre, nódulo pe- queño en el lado derecho, nada en el izquierdo. El nódulo continuó creciendo hasta el 5 de octubre, en que alcanzó el tamaño de una guinda. El 29 de setiembre, un nódulo apenas perceptible en el ar- co superciliar izquierdo. Se sacrificó el 5 de octubre y se conservó como pieza anatómica. Resultado: positivo. Incubación-, 12 días. 8a. El 30 de agosto de 1913,se inoculó, en las mismas condicio- nes que el anterior, el mono que sirvió el 13 de junio para el expe- rimento n° 2. El 17 de setiembre, apareció en la ceja izquierda una eminencia redondeada y otra análoga* en la derecha 4 días des- 12 pues. El 17, el nodulo de la ceja izquierda estaba ulcerado, san- griento y ya disminuyendo de volumen; en la ceja derecha nódulo subcutáneo, muy evidente. Resultado; positivo. Incubación: 8 dias. (Lam. V.-Fig. 2). RESUMEN DE LAS INOCULACIONES HECHAS EN MONOS. Monos Fechas Incubación Exito Modo de inoculación 1 junio 13 negativo escarif. de la piel 2 julio 13 • f • « 3 16 días positivo escarific. e inyec. 4 agto. 30 15 „ ? y inyección 5 oct. 8 8 „ • ■ 6 8 „ | y y y 7 agto. 30 12 „ > » 8 f > M 8 „ , > > > conclusiones: la. Es posible trasmitir, experimentalmente, la verruga al mono; 2a. La incubación aparente dura de 8 a 16 días: 3a. La reproducción de la enfermedad se obtiene, seguramente, por inyección subcutánea {cinco resultados positivos en igual numero de monos inyectados y uno en que se asoció a la escarificación); y 4a. La inoculación por escarificación, es muy poca segura. REI NOCULACIONES. la. El 13 de julio, se reinoculó al perro n° 1, con material ve« rrucoso del enfermo n° 8 de la sala de San Francisco (Hospital 2 de Mayo). Resultado-, negativo. 2a. El 24 de agosto, se reinoculó al asno n° 1, por inyección subcutánea en la nariz con material del enfermo n° 4 de la sala de San Roque (Hospital 2 de Mayo). Resultado: negativo. 3a. El 24 de agosto, se reinoculó al mono n° 3. La inoculación se hizo por inyección subcutánea en la raiz de la nariz. Resultado: negativo. Se puede deducir de los tres experimentos que dejamos ano- tados, que un primer ataque confiere inmunidad. CONCLUSIONES GENERALES: la. El conejo, el perro, la cabra, el carnero, el asno y el mono, son sensibles a la infección verrucosa; 2a. El periodo de incubación varía de 8 a 22 días, según la es- pecie y el individuo; 3a. Una inoculación positiva confiere inmunidad; y 4a. No hemos observado generalización de la enfermedad. Lamina IV Fig. 2 Mono Cebus. -Verruga nodular en el arco superciliar derecho y tres ve- rrugas nodulares casi fusionadas en el izquierdo. Fig. 1 Mono Cebus -Verruga nodular en la raíz de la nariz y verruga ulcerada en el arco superciliar izquierdo Lamina V Fig. 2 Mono Cebns.-Verruga nodular en el areo su- perciliar derecho y verruga ulcerada en el izquierdo. Fig. 1 Mono Cebus (Dibujo del natural).-Dos nodulitos ve- rrucosos en el arco superciliar derecho Uno en el izquierdo, Uno en el párpado inferior del mismo lado y el quinto en el ángulointerno del ojo derecho PRIMERAS TENTATIVAS DE INMUNIZACION EN LA VERRUGA PERUANA L* n un trabajo anterior hemos demostrado que muchos ani- i^males son fácilmente receptivos á la verruga peruana, como el conejo, el perro, el mono, la cabra,el carnero y el asno. Contando, pues, con tan amplio campo de experimentación, he- mos emprendido varios estudios sobre la verruga, de los que solo podemos dar á conocer, por ahora, algunos datos. RESISTENCIA DEL VIRUS VERRUCOSO. El v.irus verrucoso es muy frágil; la desecación prolongada du- rante 24 horas, el calentamiento á 60 grados por una hora y aún por media hora, son suficientes para destruir su virulencia. La glicerina pura y neutra, destruye también su poder virulento en 48, 36 y 24 horas. Acción del calor.- la. El conejo n° 12, fué inoculado en los testículos el día 13 de julio, con verruga extraída de la piel del enfermo n.° 8, de la sala de «San Francisco» del Hospital «Dos de Mayo», triturada hasta la consistencia de papilla, diluida en agua fisiológica en la propo- ción de 1:20 y calentada poruña hora á 56° centígrados. En ninguno de los testículos se produjo neoformación.El resultado fué enteramente negativo. Testigos.-El mismo día 13 de julio, fueron inoculados los co- nejos nos. 6 y 7, machos, blancos, por inyección intratesticular 14 con el mismo virus verrucoso no calentado y en ambos se produ- jeron nodulos verrucosos intratesticulares. 2a. El 3 de agosto de 1913, se inocularon los conejos N. 17 y 19, con verruga de la piel del enfermo n° 4, de la sala de «San Roque», triturada, diluida y calentada a 55° centígrados por 30 minutos. La inoculación se hizo en el testículo. No se produjo ninguna neofor- mación. Testigos.-El mismo día se inocularon los conejos machos nos. 15 y 16, con el mismo virus, no calentado. En ambos testes inyec- tados, se produjeron nodulos verrucosos. Acción de la glicerina.- El 24 de agosto de 1913, se extirpó una verruga de la piel del enfermo n° 7, de la sala de «San Roque» del Hospital «Dos de Ma- yo», y se guardó por 24 horas, en el cuádruple de su peso de gliceri- na pura, neutra y esterilizada. Al cabo de este tiempo se preparó una emulsión,que se inyectó en los testículos del conejo n.° 25. No se produjo, ni reacción ni nó- dulo verrucoso. El 27 de agosto, se hizo una experiencia semejante en el co- nejo n° 26, con una verruga del mismo enfermo, pero conservada en glicerina no 24, sino 77 horas; el resultado fué idéntico, es de- cir, absolutamente negativo. Posteriormente, estos animales recibieron, en inyección intra- testicular, verruga conservada solo 24 horas en glicerina, El resulta- do fué también negativo. Debemos agregar para terminar, que se puede inactivar tam- bién el virus por la acción del agua fisiológica a 37°, durante 5 días y por la del suero humano a la misma temperatura y por el mismo tiempo, lo que prueba su extrema fragilidad. Una experiencia demuestra este hecho. El conejo n° 32, fué inoculado el día 2 de oc- tubre de 1913, por inyección intratesticular, del modo siguiente: en el testículo derecho,virus verrucoso mantenido en suero humano por 5 días a 37° centígrados, en el izquierdo, virus verrucoso con- servado en agua fisiológica 5 días á la misma temperatura de 37°. En ninguno de los testículos se desarrolló nódulo verrucoso. Los experimentos antes citados, prueban que el virus verruco- so se destruye por el calentamiento a 56° en media hora y que su contacto con la glicerina durante 24 horasy con mayor razón por más tiempo, le hace perder su poder virulento. Este segundo punto es interesante, porque manifiesta que el virus, aún desconocido, de la enfermedad de Carrión, es extraordinariamente más frágil que el de la rabia, la viruela y la vacuna, que soportan mucho tiempo,sin perder su actividad, la acción de la glicerina. Podemos, pues, concluir: Que el poder virulento del germen ve- rrucoso, puede destruirse por la calefacción a 56° y por la acción de la glicerina. Ahora bien, habiendo demostrado que los animales son sus- ceptibles a la infección verrucosa experimental y que una inocu- lación positiva les confiere inmunidad, hemos pensado que debía- mos hacer algunas tentativas de inmunización y con tal fin practicamos las experiencias siguientes: 15 INMUNIZACION CON EL VIRUS CALENTADO. la. El 13 de julio de 1913:se inoculó el conejo n° 10, bajo la piel del vientre; con verruga de la piel del enfermo n° 8 de la sala de San Francisco del Hospital «Dos de Mayo», triturada y diluida al 1:20, en solución fisiológica y calentada por 30 minutos a 56°; 21 días más tarde, se le hizo una inoculación virulenta intratesticular, con virus verrucoso del enfermo n° 4, de la Sala de San Roque. El 17 de agosto, o sea, dos semanas después, se desarrollaron en ambos tes- tículos nódulos verrucosos. Esta experiencia demostró, que el procedimiento de inmuni- zación empleado era insuficiente. 2a. El mismo 13 de julio, se inoculó el conejo n° 12, macho, por inyección intratesticular, con virus verrucoso diluido en solución fi- siológica y calentado á 56°-60° por 30 minutos. El 3 de agosto, es decir, á las tres semanas, recibió una in- yección de virus verrucoso en ambos testículos. No se produjo no- dulo verrucoso. 3a. El 3 de agosto, se inoculó el conejo n° 17, con virus verru- coso calentado a 56° por 30 minutos. Inoculación intratesticular. El material procedía del enfermo n° 4 de la sala de San Roque. El 24 se le hizo una inoculación virulenta intratesticular. Hasta el Io de setiembre, en que se practicó la autopsia no hubo ningún nodulo verrucoso. 4a. El conejo n° 18, recibió tres inyecciones consecutivas de vi- rus verrucoso, bajo la piel del vientre, en los días: 3 de agosto, 24 de agosto y 14 de setiembre de 1913. El 21 de setiembre, recibió una inyección intratesticular de vi- rus proveniente del enfermo n° 49 de la sala de San Roque del Hos- pital «Dos de Mayo». Se le autopsió el 10 de Octubre de 1913, para examinar el tejido testicular queseencontró completamente'normal. 5a. El conejo n° 19, recibió tres inyecciones consecutivas de virus verrucoso calentado a 56° por 30 minutos. La inyección se hizo en el tejido testicular. Fecha de las inyecciones: 3 de agosto, 24 de agosto y 14 de se- tiembre de 1913. El 21 de setiembre, recibió una inoculación verrucosa virulen- ta en cada testículo. Se le sacrificó el 24 de octubre para hacer el examen histológico. Testículos indemnes de toda neoformación verrucosa. 6a. El conejo n° 24, recibió tres inyecciones de virus verrucoso calentado a 56° por 30 minutos. Fecha délas inyecciones: 24 de agosto, 14 de setiembre y 21 de setiembre de 1913. Estas inyec- ciones se practicaron bajo la piel del vientre. El 8 de octubre, recibió una inoculación virulenta intrates- ticular. El resultado de esta inoculación fué negativo. Experimentos: 1° el conejo n° 25, recibió el día 26 de agosto de 1913, una in- yección intratesticular de emulsión glicérica de verruga, á las 48 horas de preparada. INMUNIZACION CON EL VIRUS GLICERINADO. 16 El 15 de setiembre, recibió una inyección igual, pero solo de 24 horas preparada. El 9 de octubre, recibió una tercera inyección de 24 horas de preparada. El 12 de octubre, se le hizo una inoculación en cada testículo, con virus verrucoso del enfermo n° 10 de la sala de San Roque del Hospital Dos de Mayo. Se le sacrificó el 26 de octubre y no se observó nada de anor- mal en los testículos. 2° El conejo n° 26, recibió la primera inyección de verruga conservada 77 horas en glicerina, el día 27 de agosto. La inyección fué intratesticular. La segunda se le hizo el 15 de setiembre, pero con verruga conservada solo 24 horas en glicerina. La tercera se le hizo el 9 de octubre, en las mismas condiciones que la segunda. El 12 de octubre, recibió la inoculación intratesticular virulen- ta. El 19 de octubre se le hizo la autopsia. No había formación ve- rrucosa alguna y si abcesos caseosos en uno de los testes, en el ri- ñón y bajo la piel. De los experimentos relatados se deduce: Io Que la inoculación de productos verrucosos no virulentos, suscita en los conejos reacciones humorales de inmunización; 2o Que la inmunización regional se adquiere más fácilmente que la general. 3o Que puede conferirse al conejo sólida inmunización, tanto por la vía intratesticular, como por la piel; 4o Que la inmunización puede obtenerse con productos ate- nuados por la glicerina ó muertos por la acción del calor; y 5o Que parece preferible despertar la formación de sustancias inmunizantes, mediante varias inoculaciones avirulentas. Los experimentos de inmunización que practicamos en otros animales; no nos han dado resultados tan concluyentes y seguros por lo que hemos instituido diversos procedimientos de vacunación que están en ejecución, y de los que, por lo tanto, no podemos dar cuenta en este momento, Concretando lo anteriormente expuesto, podemos afirmar-, que hemos llegado á inmunizar una especie animal, contra la inoculación virulenta de verruga.