Srnstitut Pasteur 28. RUE DU DF ROUX _PARIS xv" PARIS, le SI mars 1948 TEL: SEGUR 01-10 DIRECTION Dr. J. LEDERBERG University of Wisconsin Department of Genetics MADISON Wisconsin Mon cher Joshua, Je viens de recevoir votre lettre du I7 mars, Je me sens fort coupable de n'avoir pas répondu plus tot & votre précédente lettre. A la vérité, j'attendais d'tavoir quelques résultats sur la lactase de K-12 ; j'attendais aussi de recevoir les souches que vous aviez mentionnées dans cette lettre. En fin de compte, je n'ai pas regu ces souches, et je commence a craindre qu'elleshse soient perdues en route, En ce qui concerne la lactase de K-I2, j'ai obtenu des extraits trés actifs. Mais je n'ai pas encore essa- yé de purification. A priori, j'imagine que le type de urification que j'ai employé pour la lactase de FL doit étre adéquat. Oo) Voici l'essentiel de jtechnique ;: 1) culture dey bactéries en milieu synthétique fortement tamponné avec 1 # de lactose ; 2) centrifugation et lavage avec un tampon phos- phate M/IO , pH 6.8 ; 3) 40 g environ de bactéries (humides) sont mis en suspension dans 50 cc de tampon. On mélange avec du sable fin et on agite pendant 30 minutes dans un appareil &@ secousses trés rapides. La pate crémeuse résultant de cette opération est additionnée de I50 cc de tampon. On agite fortement Snstibat Pasteur 28, RUE DU DF ROUX-PARIS xve TEL SEGUR 01-10 DIRECTION et l'on centrifuge pendant I5 minutes & I0,.000 tours. Le culot constitué par le sable et les débris bactériens est rejeté. Le liquide surnageant est centrifugé de nouveau & froid pendant 2 heures 4 12.000 tours. On élimine le culot (microsomes ??). Le liquide surnageant est éventuellement additionné de tampon de fagon & avoir exactement 200 ec de liquide. On ajoute dmsiwaid 150 cc de sulfate d'ammoniaque saturé (tampon 1/10, pH 6.8). L'opération se fait & 0°, On centrifuge aprés 30 minu- tes A 0°, Le liquide surnageant est rejeté. On reprend le culot par: I00 cc de tampon. Ces I00 cc sont addi- tionnés de 50 cc de sulfate d'armoniaque saturé (tou- jours dans du tampon & pH 6.8). Aprés JO minutes a O°, on centrifuge de nouveau. Le liquide surnageant est rejeté. Le culot est repris par 3 ou 4 cc de tampon pH 6.8. On agite avec précaution et soigneusement pour redissoudre tout ce qui est soluble, Cette solution . trouble est conservée A la glacitre pendant une nuit. On centrifuge le lendemain pour 6liriner la partie inso- luble. Ctest par cette technique que j'ai obtenu les veil- leurs résultats. Un point est important : il faut faire la premiére précipitation par le sulfate d'amnoniaque aussitot que possible aprés l'extraction par le sable, sinon la précipitation staccompagne d'inactivation. Je n'ai pas encore cherché & pousser la purification beaucoup plus loin. la fraction obtenue par cette mé- thode est environ I0 & I5 fois plus active que l'extrait brut, de suis actuellement en train d'essayer de puri- fier partiellement la maltase, mais cela paratt plus dif- ficile que pour la lactase. Je n'ai pas poursuivi d'es- sais avec K-12, la raison principale étant que je n'ai pas obtenu de maltase trés active avec cette souche, alors que la maltase de iL est assez active. J'espére que ces renseignements pourront vous étre utiles. Je vous souhaite bonne chance dans vos pvrifi- cations, Je continue d'espérer recevoir les mutants maltose négatifg de K-I2 qui m'intéressent fort, J'ai récemment obtenu,d'ailleurs grace & votre méthode(ENVB) des mu- tants maltose négatif de ML. Je vais essayer aussi d'ob- CA Snstitnt Pastewr 28. RUE DU DF ROUX-. PARIS xve TEL: SEGUR Q1-10 ~S _ ye e